产品货号：
WE0405
中文名称：
结核分枝杆菌耐药基因突变检测试剂盒
英文名称：
Diagnostic kit for detection of Drug Resistance Mutations in Mycobacterium tuberculosis
产品规格：
100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是以Real-timePCR仪为平台，利用不对称PCR扩增技术，通过分析比较特异的荧光标记寡核苷酸探针同与其完全互补单链PCR产物（野生型）以及存在突变的单链PCR产物（突变型）结合所产生熔解曲线Tm值的变化，可一次快速检测5种与耐多药相关基因所包含的至少16个位点的突变。此16个突变位点包括：rpoB基因的511、513、515、516、518、519、526、531和533号密码子，embB基因的306号密码子，katG基因的315密码子，inhA基因的-15位点以及ahpC基因-6、-9、-10、-12位点。
本试剂盒PCR反应I检测rpoB基因位点突变， PCR反应II检测katG和inhA基因位点突变，PCR反应III检测embB和ahpC基因基因位点突变。与阴性（野生型）对照品相比，如PCR反应I中的熔解曲线峰Tm值降低，则为利福平耐药株；如PCR反应II或PCR反应III中的熔解曲线峰Tm值降低，则为异烟肼耐药株
使用目的
通过检测自临床结核病人分离的结核分枝杆菌是否存在与利福平和异烟肼耐药相关的常见基因突变，为临床耐药结核分枝杆菌感染诊断和用药方案的制订提供辅助诊断依据。
实验原理
利福平和异烟肼是结核病治疗方案中关键的一线药物，也是最容易出现耐药性的抗结核药物。97%利福平耐药株是由于rpoB基因突变所致，突变主要集中在一段81bp耐药核心区域。异烟肼耐药性主要与编码过氧化氢酶-过氧化物酶的katG基因、编码还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性烯酰基载体蛋白还原酶的inhA基因启动子区域和编码烷基过氧化氢酶的ahpC基因启动子区域突变相关。另外，embB306位点突变是一个高特异性的与结核耐多药相关的遗传标记。
| 组分 | 规格 |
| PCR反应液I（4×） | 120μL |
| PCR反应液II（4×） | 120μL |
| PCR反应液III（4×） | 120μL |
| 溶液A（4×） | 350μL |
| 溶液B（4×） | 350μL |
| 阴性（野生型）对照品 | 50μL |
保存：-20℃
适用仪器
Real-timePCR扩增仪
样品要求
将临床痰培养阳性病例分离的结核分枝杆菌菌株用常规煮沸法进行DNA的提取。将获得的基因组DNA，取1~3 μl用作PCR扩增模板，或-20℃保存备用。
注意事项
- 开始检测前请仔细阅读本说明书全文，并严格按照要求进行操作。
- 实验过程中应穿着专用工作服和使用一次性手套，操作人员应受过专业训练或具有一定操作经验。
- 整个检测过程应严格分在三区进行：PCR反应体系配制区；标本处理、加样区；PCR扩增、荧光检测及结果分析区。
- PCR操作各阶段使用专用的仪器和设备。
- 试剂准备应在超净工作台中，标本处理应在生物安全柜内进行，避免对环境污染。试验中接触过样品和标准品的废弃物品（如吸头）、扩增完的离心管、标本均应经无害化处理后方可丢弃。
- 实验前应该对实验室进行紫外线消毒，并用70%乙醇清洗工作台和微量加样器。
- 实验所用移液器（加样器）的移液吸头不应反复使用。
- 不同批号的试剂请勿混合使用。
一、PCR扩增
- 每份样本测定采用3个PCR反应，反应管的试剂加入量按下表进行：
每次试验需同步检测阴性（野生型）及空白对照。阴性对照管中的模板为试剂盒中提供的野生型对照，空白对照分别用三种PCR反应液不加模板同步反应作为试剂盒提供的空白对照；整个操作过程都应在冰浴中进行，试验完毕后将剩余试剂放回-20°储存。成分 反应管1 反应管2 反应管3 无菌超纯水 2～4μL PCR反应液I 5μL — — PCR反应液II — 5μL — PCR反应液III — — 5μL 溶液A 5μL 溶液B 5μL 样本DNA 1～3μL 总体积 20μL - PCR扩增程序：
注：在第一个58℃时收集荧光，荧光检测通道选择FAM和Rox检测通道。
二、熔解曲线分析
温度40～85℃，每个步骤升高0.5℃，每个温度维持5s，在每个温度都收集荧光。荧光检测通道选择FAM和Rox检测通道。
三、结果分析
当荧光定量PCR仪运行结束后，用其配套软件对本次试验的结果进行衍生熔解曲线（-dF/dT）分析。与阴性（野生型）对照品相比，若PCR反应I中的熔解曲线峰Tm值降低，则为利福平耐药株（如下图所示）；若PCR反应II或PCR反应III中的熔解曲线峰Tm值降低，则为异烟肼耐药株。
相关搜索：结核分枝杆菌耐药基因突变检测试剂盒